До начала работы проводят стерилизацию помещения лаборатории бактерицидными лампами. После этого до начала взятия спермы готовят синтетическую среду для разбавления и замораживания спермы.
Предварительная визуальная оценка эякулята: отсутствие примесей гноя, крови, мочи или хлопьев, сперма должна иметь молочно-белый цвет с сероватым оттенком и сливкообразную консистенцию. Затем сперму оценивают по подвижности, используя микроскоп (увеличение в 120-200 раз) с нагревательным столиком (38-40°).
Хорошо настроенный микроскоп и правильно подготовленный препарат (одна капля 2,9%-ного цитрата натрия (трехзамещенный пятиводный + одна капля спермы, накрыть покровным стеклом) позволяют качественно оценивать состояние эякулята по 10-балльной системе (10 баллов – все сперматозоиды имеют прямопоступательные движения; 9 баллов – 90% и т.д.). Колебательные и манежные движения считаются анормальными.
При агглютинации сперматозоидов сперма выбраковывается. Концентрацию сперматозоидов определяют с помощью фотоэлектрокалориметра (ФЭК) или фотометра. Качественный эякулят должен иметь соответствующие концентрацию (800 млн мл и более), подвижность (7 баллов и более), процент спермиев с аномальной морфологией (менее 18%). Такая сперма допускается для первичного разбавления.
Разбавление спермы. После первичной оценки сперму каждого эякулята в спермоприёмнике или смесителе разбавляют средой температурой 27°С в соотношении 1:1 и оставляют при комнатной температуре 18-20°С на 15-20 мин. Среду вводят медленно по стенке смесителя. Окончательное разбавление спермы проводят средой комнатной температуры в зависимости от концентрации и подвижности сперматозоидов в эякуляте (в одной дозе разбавленной и замороженной спермы после оттаивания должно быть не менее 15 млн сперматозоидов с прямолинейным поступательным движением).
После раздельного разбавления каждого эякулята, полученного от одного быка, их соединяют в одну ёмкость и переносят в лабораторию для замораживания.
Замораживание спермы. До начала работы все помещения лаборатории облучают бактерицидными лампами. Расходные материалы, необходимые для выполнения технологического процесса замораживания спермы (соломинки, иголки, шприцы, уплотнители, рейки и т.д.), должны быть стерильными.
